③固定時間在4～24 h之間，長時間固定會影響抗原決定簇的暴露，且容易出現自發(fā)熒光及非特異性染色。

④抗原修復時，高壓時間過長，應適當縮短時間。

⑤烘干溫度為50℃，時間為12～24 h。

④脫蠟不全，可更換脫蠟劑或延長脫蠟時間。

②切片上滴加的試劑未覆蓋均勻或未覆蓋到全部組織，邊緣的試劑少，容易變干，導致邊緣的試劑濃度比中心區(qū)域的高，而使得染色結果偏深。滴加試劑時要均勻且充分覆蓋到全部組織，為防止邊緣水分減少，滴加試劑時可以適當超出組織邊緣2 mm左右，保證組織部分覆蓋均勻。用組化筆畫圈時，距組織邊緣3-4 mm為宜，避免油劑對實驗結果的影響。

⑥抗原擴散，嘗試使用交聯固定劑而不是有機（醇類）固定劑。

解決方法：①不當的固定方式或固定時溫度過高，影響待測抗原的數量和質量，應根據組織選擇更適宜的固定方式及溫度。

③避免切片在緩沖液或修復液中浸泡時間過長（大于 24 h）。

解決方法：①不適當的抗原修復方式，導致抗原決定簇暴露不足，需摸索修復條件，改變抗原修復方法。