當(dāng)前位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 常用試劑 > 普通試劑 > C6031脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑
簡(jiǎn)要描述:脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑Lip2000 是一種新型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA 和 RNA)轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞,具有低細(xì)胞毒性;對(duì)多種類(lèi)型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。適用范圍:貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞(脯乳動(dòng)物細(xì)胞系)的轉(zhuǎn)染。
產(chǎn)品分類(lèi)
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品牌 | Bioss | 貨號(hào) | C6031 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑
保存條件 2-4℃保存一年(避免冷凍)。
脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Lip2000 是一種新型的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。適合于將核酸(DNA 和 RNA)轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞,具有低細(xì)胞毒性;對(duì)多種類(lèi)型的細(xì)胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率;轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。適用范圍:貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞(脯乳動(dòng)物細(xì)胞系)的轉(zhuǎn)染。
質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染:
對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),DNA(µg)與 Lip2000(µI)的比例為 1:2~3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平,并能減少細(xì)胞毒性。
1. 以 24 孔板為例
a. 貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,用 500 µI 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 0.5-2×10
5 細(xì)胞,使之第二天能達(dá)到 70- 90%匯合。
b. 懸浮細(xì)胞:在準(zhǔn)備 DNA-Lip2000 復(fù)合物之前,用 500 µI 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 4-8×10
5 細(xì)胞即可。
2. 對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品,進(jìn)行以下操作
a. 在eppendorf管里分別加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA,輕柔混勻,制成DNA稀釋液。
b. 在另一個(gè)eppendorf管里分別加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 µI Lip2000(注意用前 先混 勻),輕柔混勻,制成Lip2000 稀釋液,室溫靜置5分鐘。
c. 將DNA稀釋液和Lip2000稀釋液混合,輕柔混勻,室溫靜置20分鐘,形成DNA-Lip2000復(fù)合物。DNA-Lip2000復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)。
3. 將DNA-Lip2000復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中,將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng),使復(fù)合物分散均勻。
4. 在37℃ 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí)后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)18-48小時(shí)。
5. 如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株,則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中,第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響,可以對(duì)DNA和Lip2000的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化,一般在1: 0.5~5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA (µg)和Lip2000(µI)的比例。
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